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domingo, 6 de diciembre de 2015

Vectores de clonacion YPR e YCP

  Los vectores YPR son independientes, circulares y tiene capacidad de autorreplicación debido a que llevan incorporado un origen de replicación. La frecuencia de transformación es de 103 ó 104 por μg de ADN, aunque es poco estable en mitosis y meiosis. La célula hija suele perderlo y la célula madre tiende a acumularlo. Solo aparece el plasmido en el 5% de la población siendo poco eficaz.
  Los vectores YCP son muy parecidos a YRP, pero si diferencia en que presenta un centrómero. Son minicromosomas. Gracias a la secuencia Cen segregan 1:1 en mitosis y 2:2 en meiosis. No suele haber más de una copia por célula. Se suele perder en una frecuencia del 1% por generación. Hay varios cortes que producen diferentes integraciones, pero lo más normal es cortar en secuencias únicas.  

viernes, 20 de noviembre de 2015

Vectores de clonacion YIP

*    Los vectores YIP son los integrativos y pertenecen al no independiente, es decir que no pueden replicarse sin que lo haga la célula. Son los más simples, tienen una gran cantidad de ADN basura, no se autorreplican, ya que deben integrarse en el genoma. Debe tener secuencias homologas para la recombinación. Una vez dentro el proceso de recombinación puede producirse al revés, es decir salir el vector. Esto se produce con una frecuencia de 0´1 a 1% por generación. Son muy eficaces en la transformación obteniendo de 1 a 10 veces por cada μg de ADN. Puede aumentar mil veces si los cortamos antes con una endonucleasa en la secuencia homologa. Al producir el corte dirigimos la integración en el genoma.

jueves, 5 de noviembre de 2015

Vectores de clonación

Los vectores de clonación pueden ser de diferentes tipos. Los de Sacaromyces son todos plasmados y no están basados en virus porque no hay virus infectivos. Los vectores los podemos clasificar en no independientes, independientes y los especiales. Dentro de los no independientes tenemos el YIP. Dentro de los independientes tenemos el YRP, YCP, YEP. Los especiales son YAC, YXP, YTP y Ty. La mayoría de los especiales y los independientes no presentan un marcador especial como el gen de resistencia a antibiótico y el marcador que presenta es eucariota que complementa la auxotrofia de la levadura para su posterior selección.  Presenta origen de replicación bacteriano y origen eucariótico.